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용액에 있는 다른 전해질의 농도와 이온의 세기, skim milk, shaker, 전기영동기, Ponceau, n-butanol, 알코올 용어정리 Western blotting : antigenic epitope과 반응하는 antibody를 이용하여 단백질 혼합물 중에서 원하는 단백질 (antigen)만을 찾아내는 방법.의학, Vertical slab gel unit, 크기와 모양, 팁, methanol, e. Western blot의 원리 표적 단백질에 대한 항체를 이용하여 항원-항체 반응으로 그 단백질을 확인하는 방법.hwp [의학,약학 자료실 영양생화학 실험 - SDS-PAGE에 의한 단백질 분리와 Western Blotting 다운로드 ???? 파일문서 (압축파일). Electrotransfer : 단백질을 전기로 전송하는 것. 3. SDS-PAGE : sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Gel Electrophoresis : 겔 전기영동. 전기영동의 원리 전기영동은 전기장을 이용하여 입자를 양극 또는 음극쪽으로 이동시키는 현상을 말한다. 단백질을 비특이적으로 결합하는 nitrocellulose paper의 특성을 이용하여 SDS…(생략)  ......

 

 

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영양생화학 실험 - SDS-PAGE에 의한 단백질 분리와 Western Blotting

실험제목

SDS-PAGE에 의한 단백질 분리와 Western Blotting

실험목표

SDS-PAGE로 단백질을 분리한 후 전기영동을 통해 단백질의 분자량을 측정, 단백질항체이용 분석을 할 수 있다.

실험기구 및 시약

pipette, 마이크로 피펫, e.p 튜브, 팁, 볼텍스기, SDS-gel, Vertical slab gel unit, comb, n-butanol, methanol, 3MM paper, blocking buffer, Ponceau, skim milk, 전기영동기, transfer장치, nitrocellulous paper, 스펀지, fillter paper, shaker, ECL 시약, flim, 랩, 알코올

용어정리

Western blotting : antigenic epitope과 반응하는 antibody를 이용하여 단백질 혼합물 중에서 원하는 단백질 (antigen)만을 찾아내는 방법.

SDS-PAGE : sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis

Gel Electrophoresis : 겔 전기영동. DNA나 RNA, 단백질과 같은 큰 분자들을 전기적인 힘을 이용하여 겔에서 이동시켜 크기에 따라 서로 분리하는 기술.

Electrotransfer : 단백질을 전기로 전송하는 것.

실험원리

1. 전기영동의 원리

전기영동은 전기장을 이용하여 입자를 양극 또는 음극쪽으로 이동시키는 현상을 말한다. 이 때 이동하는 속도는 입자의 전하량, 크기와 모양, 용액의 pH와 점성도, 용액에 있는 다른 전해질의 농도와 이온의 세기, 지지체의 종류 등 여러 가지 요인에 의해 결정된다.

이 때 아크릴아미드 겔을 사용하는데 서로 다른 그물조직을 가진 두 가지 아크릴아미드 겔을 포개어 층을 이루게 하고 지지체의 그물조직의 구멍의 크기는 아크릴아미드의 농도를 변화시킴으로써 임의로 바꿀 수가 있다. 예를들어 상층은 덜 촘촘한 겔이어서 단백질을 농축하는 역할을 한다. 따라서 아크릴아미드 겔은 분자를 질량에만 의존하는 분리가 가능하다.

 

2. SDS-PAGE에 의한 단백질 분리의 원리

SDS-PAGE는 폴리아크릴아미드 겔의 그물조직을 지지체로 사용한다. 또한 SDS가 단백질의 구조를 파괴하게 되면서 모든 단백질에 대해 SDS가 결합하게 되면서 전하가 일정하게 된다. 그리하여 전기장에서 질량만 가지고도 이동시킬 수 있게 된다.

 

3. Western blot의 원리

표적 단백질에 대한 항체를 이용하여 항원-항체 반응으로 그 단백질을 확인하는 방법.

단백질을 비특이적으로 결합하는 nitrocellulose paper의 특성을 이용하여 SDS…(생략)

 

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