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Intro ......

 

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Index & Contents

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영양생화학 실험 - SDS-PAGE에 의한 단백질 분리와 Western Blotting

실험제목

SDS-PAGE에 의한 단백질 분리와 Western Blotting

실험목표

SDS-PAGE로 단백질을 분리한 후 전기영동을 통해 단백질의 분자량을 측정, 단백질항체이용 분석을 할 수 있다.

실험기구 및 시약

pipette, 마이크로 피펫, e.p 튜브, 팁, 볼텍스기, SDS-gel, Vertical slab gel unit, comb, n-butanol, methanol, 3MM paper, blocking buffer, Ponceau, skim milk, 전기영동기, transfer장치, nitrocellulous paper, 스펀지, fillter paper, shaker, ECL 시약, flim, 랩, 알코올

용어정리

Western blotting : antigenic epitope과 반응하는 antibody를 이용하여 단백질 혼합물 중에서 원하는 단백질 (antigen)만을 찾아내는 방법.

SDS-PAGE : sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis

Gel Electrophoresis : 겔 전기영동. DNA나 RNA, 단백질과 같은 큰 분자들을 전기적인 힘을 이용하여 겔에서 이동시켜 크기에 따라 서로 분리하는 기술.

Electrotransfer : 단백질을 전기로 전송하는 것.

실험원리

1. 전기영동의 원리

전기영동은 전기장을 이용하여 입자를 양극 또는 음극쪽으로 이동시키는 현상을 말한다. 이 때 이동하는 속도는 입자의 전하량, 크기와 모양, 용액의 pH와 점성도, 용액에 있는 다른 전해질의 농도와 이온의 세기, 지지체의 종류 등 여러 가지 요인에 의해 결정된다.

이 때 아크릴아미드 겔을 사용하는데 서로 다른 그물조직을 가진 두 가지 아크릴아미드 겔을 포개어 층을 이루게 하고 지지체의 그물조직의 구멍의 크기는 아크릴아미드의 농도를 변화시킴으로써 임의로 바꿀 수가 있다. 예를들어 상층은 덜 촘촘한 겔이어서 단백질을 농축하는 역할을 한다. 따라서 아크릴아미드 겔은 분자를 질량에만 의존하는 분리가 가능하다.

 

2. SDS-PAGE에 의한 단백질 분리의 원리

SDS-PAGE는 폴리아크릴아미드 겔의 그물조직을 지지체로 사용한다. 또한 SDS가 단백질의 구조를 파괴하게 되면서 모든 단백질에 대해 SDS가 결합하게 되면서 전하가 일정하게 된다. 그리하여 전기장에서 질량만 가지고도 이동시킬 수 있게 된다.

 

3. Western blot의 원리

표적 단백질에 대한 항체를 이용하여 항원-항체 반응으로 그 단백질을 확인하는 방법.

단백질을 비특이적으로 결합하는 nitrocellulose paper의 특성을 이용하여 SDS…(생략)

 

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